Resposta Immunitària i Biomarcadors

El Servei de Resposta Immune i Biomarcadors proporciona quantificació avançada d’una àmplia gamma de biomarcadors en diversos tipus de mostres biològiques, utilitzant tecnologies com ELISA, xMAP Luminex i proteòmica dirigida amb OLINK (Certified International Core Lab).

Els biomarcadors analitzats són principalment proteïnes, incloent anticossos de diferents isotips i subclasses contra panells d’antígens personalitzats, així com altres analits relacionats amb el sistema immunitari com citocines, quimiocines i factors de creixement. A més, també es poden avaluar biomarcadors associats a altres vies fisiològiques, incloent processos metabòlics, neurològics i cardiovasculars.

Els punts forts de la plataforma inclouen:

• Capacitat de multiplexació, que permet generar dades multiparamètriques a partir d’una sola mostra (Luminex i OLINK).
• Miniaturització, adequada per a estudis amb volums de mostra limitats (p. ex., cohorts pediàtriques).
• Versatilitat i adaptabilitat (necessitats personalitzades; kits comercials o desenvolupats internament).
• Alta capacitat de processament mitjançant sistemes semiautomatitzats de manipulació de líquids.
• Assajos funcionals d’anticossos (p. ex., inhibició d’unió i neutralització subrogada).
• Complementarietat de tecnologies, que permet la validació creuada de biomarcadors (p. ex., Luminex vs OLINK per a citocines i altres biomarcadors).

Es desenvolupen panells personalitzats utilitzant proteïnes recombinants (comercials o produïdes internament en sistemes procariotes o eucariotes) i anticossos monoclonals (mAbs) per a aplicacions específiques. Això permet un fenotipat immunològic en profunditat, mitjançant citometria espectral, així com l’anàlisi de respostes específiques de cèl·lules T mitjançant tinció intracel·lular de citocines (ICS) i assajos de marcadors induïts per activació (AIM), juntament amb citometria de flux i assajos ELIspot/FluoroSpot.

S’ofereixen les següents capacitats i coneixements específics com a valor afegit:

• Àmplia experiència en monitoratge immunològic.
• Trajectòria consolidada de l’equip.
• Control de qualitat (QA/QC) integrat i pipelines de preprocessament en R.
• Possibilitat de realitzar anàlisis estadístiques, assessorament, formació i desenvolupament de capacitats per a personal de laboratoris en països de renda baixa i mitjana (LMIC).

Serveis

• Assajos ELISA i colorimètrics mitjançant kits comercials o desenvolupats internament per mesurar concentracions de diferents analits.
• Assajos multiplex de citocines mitjançant Luminex amb kits comercials per mesurar proteïnes com citocines, quimiocines, factors de creixement o altres, així com expressió gènica mitjançant panells Invitrogen™ QuantiGene™ Plex.
• Assajos multiplex d’anticossos mitjançant Luminex desenvolupats pel grup per mesurar nivells i avidesa d’IgM, IgA, IgA1, IgA2, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 i IgE davant de panells flexibles d’antígens de diferents microorganismes.
• Assajos funcionals d’anticossos mitjançant Luminex.
• Assajos Olink amb kits comercials per mesurar fins a 92 biomarcadors en format multiplex (T96, T48 i 21-Flex) (Certified International CoreLab).
• Altres assajos cel·lulars (cèl·lules T, cèl·lules B) sota demanda (citometria de flux, ELIspot/FluoroSpot). Per a aquestes tecnologies s’ofereix:
  • Assessorament sobre marcadors, tecnologies (ELISA, Luminex, Olink) i kits segons els objectius de l’estudi.
  • Disseny experimental.
  • Contacte amb proveïdors i elaboració de pressupostos.
  • Compra de reactius i kits.
  • Execució dels assajos.
  • Control de qualitat (QA/QC) de les dades generades.
  • Addicionalment: citometria de flux i ELIspot/FluoroSpot (adquisició/lectura mitjançant la plataforma IDIBAPS).

Equipament

• CytoFLEX (Beckman Coulter)
• Accés a la unitat de citometria de flux del PCB (Cytek Aurora; 4 làsers, espectral)
• Accés al lector de microplaques ELISA del PCB (lector de microplaques TECAN Infinite® M Plex)
• Dos rentadors automàtics (BioTek)
• Equips Luminex: un Magpix, un Luminex 100/200 i dos FlexMap3D
• Accessoris per a assajos Luminex:
  • Kingfisher Flex 96 deepwell (Thermo Fisher) per a l’acoblament automàtic d’antígens
  • Integra Assist Plus i Integra Viaflo 384 (Integra) per al maneig de líquids en plaques de 384 pous
  • Dos agitadors orbitals per a plaques de 96 pous (Thermo Fisher)
  • Dos agitadors orbitals per a plaques de 384 pous (Heidolph Titramax)
• Guava easyCyte per al recompte automàtic de microesferes i cèl·lules
• OLINK Signature Q100
• Accessoris per a assajos OLINK:
  • Plaques d’interfície Signature Q100: 96.96, 48.48 i 24.192
  • Centrífuga per a plaques (Eppendorf 5430/5430R)
  • Microcentrífuga per a tubs (IKA Mini G, Fisher Scientific)
  • Vòrtex controlat per a plaques (MaxMate Eppendorf)
  • Suport de tubs per a vòrtex (MixMate PCR 96, Eppendorf)
  • Pipetes de precisió mono i multicanal (Rainin, Mettler Toledo)
  • Bloc de congelació (-20 ºC) per al maneig enzimàtic
  • Termociclador PCR (SimpliAMP, Applied Biosystems)
• Programari per a ELISA (GraphPad Prism), Luminex (Xponent 4.3), Olink (NPX Signature) i citometria de flux (FlowJo)
• Ella™ automated ELISA (Bio-Techne)

Aquest servei científic (core facility) forma part de la plataforma CERCAGINYS.

Control de qualitat

• Política de qualitat
• Certificat ISO 9001
• Certificat Olink

Projectes seleccionats

• ATHLETE - Advancing Tools for Human Early Lifecourse Exposome Research and Translation
  Organisme finançador: EU-H2020
  Estat: En execució
• BISC - Barcelona Life Study Cohort
  Organisme finançador: EIC-HEI
  Estat: Finalitzat
• COVICAT - Cohort Covid-19 a Catalunya
  Organisme finançador: CERCA, EIT Health, “la Caixa” Social Research Grant SR20-01024
  Estat: En execució
• EPHOR - Exposome Project for Health and Occupational Research
  Organisme finançador: EU-TNO (NED)
  Estat: En execució
• Baseline host and environmental factors that impact pre-erythrocytic malaria vaccine (hypo)responsiveness in endemic regions
  Organisme finançador: NIAID-NIH (USA) et al.
  Estat: En execució
• END-VOC - Ending COVID-19 variants of concern through cohort studies
  Referència: HORIZON-HLTH-2021-CORONA-01-02
  Organisme finançador: EU-HE
  Estat: En execució
• INCENTIVE - Indo-European Consortium for Next Generation Influenza Vaccine Innovation
  Organisme finançador: EU-H2020
  Estat: En execució
• Impact of coinfections on the balance of antibody and T helper responses to antigen targets of naturally acquired and vaccine immunity to major human pathogens
  Organisme finançador: ISCIII
  Estat: Finalitzat
• Infection acquisition in early life and health outcomes in childhood
  Organisme finançador: Fundació La Marató de TV3
  Estat: Finalitzat
• CoViproteHCt - Identifying protective immunity to SARS-CoV-2 in Health Care Personnel
  Organisme finançador: EIT Health
  Estat: Finalitzat
• ANTICOV-IMMUNO - The impact of COVID-19 treatment on the type, strength and duration of antibody and cellular immune responses in SARS-CoV-2 patients in sub-Saharan Africa
  Organisme finançador: UNITAID
  Estat: Finalitzat

Publicacions seleccionades

• Evaluation of the accuracy of a multi-infection screening test based on a multiplex immunoassay targeting imported diseases common in migrant populations
  Aguilar R, Cruz A, Jiménez A, et al.; Requena-Méndez A.
  Travel Medicine and Infectious Disease. 2023;57:102681.
  DOI: 10.1016/j.tmaid.2023.102681
• Individual blood concentrations of persistent organic pollutants and chemical elements, and COVID-19: A prospective cohort study in Barcelona
  Porta M, Pumarega J, Gasul M, et al.; Moncunill G, Aguilar R.
  Environmental Research. 2023;223.
  DOI: 10.1016/j.envres.2023.115419
• Long-term exposure to air pollution and COVID-19 vaccine antibody response in a general population cohort (COVICAT Study, Catalonia)
  Kogevina M, Karachaliou M, Espinosa A, et al.; Dobaño C.
  Environmental Health Perspectives. 2023;131(4):04700.
  DOI: 10.1289/EHP11989
• RBD-based ELISA and Luminex predict anti-SARS-CoV-2 surrogate-neutralising activity in two longitudinal cohorts of German and Spanish healthcare workers
  Aguilar R, Li X, Crowell CS, et al.; Gerhard M.
  Microbiology Spectrum. 2023;11(1):e0316522.
  DOI: 10.1128/spectrum.03165-22
• Evaluation of antibody serology to determine current helminth and Plasmodium falciparum infections in a co-endemic area in southern Mozambique
  Santano R, Rubio R, Grau-Pujol B, Moncunill G.
  PLoS Neglected Tropical Diseases. 2023;16(6):e0010138.
  DOI: 10.1371/journal.pntd.0010138
• SARS-CoV-2 infection, vaccination, and antibody response trajectories in adults: A cohort study in Catalonia
  Karachaliou M, Moncunill G, Espinosa A, Dobaño C.
  BMC Medicine. 2022;20(1):347.
  DOI: 10.1186/s12916-022-02547-2
• HIV infection and placental malaria reduce maternal transfer of multiple antimalarial antibodies in Mozambican women
  Alonso S, Vidal M, Ruiz-Olalla G, Moncunill G.
  Journal of Infection. 2021;82(4):45–57.
  DOI: 10.1016/j.jinf.2021.02.024
• Highly sensitive and specific multiplex antibody assays to quantify immunoglobulins M, A, and G against SARS-CoV-2 antigens
  Dobaño C, Vidal M, Santano R, Moncunill G.
  Journal of Clinical Microbiology. 2021;59(2).
  DOI: 10.1128/JCM.01731-20
• Seven-month kinetics of SARS-CoV-2 antibodies and role of pre-existing antibodies to human coronaviruses
  Ortega N, Ribes M, Vidal M, Dobaño C.
  Nature Communications. 2021;12(1):4740.
  DOI: 10.1038/s41467-021-24979-9
• Antibody responses to the RTS,S/AS01E vaccine and Plasmodium falciparum antigens after a booster dose within the phase 3 trial in Mozambique
  Sánchez L, Vidal M, Jaroice C, Dobaño C.
  NPJ Vaccines. 2020;5:46.
  DOI: 10.1038/s41541-020-0192-7
• A balanced proinflammatory and regulatory cytokine signature in young African children is associated with lower risk of clinical malaria
  Dobaño C, Nhabomba AJ, Manaca MN, Alonso PL.
  Clinical Infectious Diseases. 2019;69(5):820–828.
  DOI: 10.1093/cid/ciy934