Resposta Immunitària i Biomarcadors

El Servei de Resposta Immune i Biomarcadors proporciona quantificació avançada d’una àmplia gamma de biomarcadors en diversos tipus de mostres biològiques, utilitzant tecnologies com ELISA, xMAP Luminex i proteòmica dirigida amb OLINK (Certified International Core Lab).

Els biomarcadors analitzats són principalment proteïnes, incloent anticossos de diferents isotips i subclasses contra panells d’antígens personalitzats, així com altres analits relacionats amb el sistema immunitari com citocines, quimiocines i factors de creixement. A més, també es poden avaluar biomarcadors associats a altres vies fisiològiques, incloent processos metabòlics, neurològics i cardiovasculars.

Els punts forts de la plataforma inclouen:

• Capacitat de multiplexació, que permet generar dades multiparamètriques a partir d’una sola mostra (Luminex i OLINK).
• Miniaturització, adequada per a estudis amb volums de mostra limitats (p. ex., cohorts pediàtriques).
• Versatilitat i adaptabilitat (necessitats personalitzades; kits comercials o desenvolupats internament).
• Alta capacitat de processament mitjançant sistemes semiautomatitzats de manipulació de líquids.
• Assajos funcionals d’anticossos (p. ex., inhibició d’unió i neutralització subrogada).
• Complementarietat de tecnologies, que permet la validació creuada de biomarcadors (p. ex., Luminex vs OLINK per a citocines i altres biomarcadors).

Es desenvolupen panells personalitzats utilitzant proteïnes recombinants (comercials o produïdes internament en sistemes procariotes o eucariotes) i anticossos monoclonals (mAbs) per a aplicacions específiques. Això permet un fenotipat immunològic en profunditat, mitjançant citometria espectral, així com l’anàlisi de respostes específiques de cèl·lules T mitjançant tinció intracel·lular de citocines (ICS) i assajos de marcadors induïts per activació (AIM), juntament amb citometria de flux i assajos ELIspot/FluoroSpot.

S’ofereixen les següents capacitats i coneixements específics com a valor afegit:

• Àmplia experiència en monitoratge immunològic.
• Trajectòria consolidada de l’equip.
• Control de qualitat (QA/QC) integrat i pipelines de preprocessament en R.
• Possibilitat de realitzar anàlisis estadístiques, assessorament, formació i desenvolupament de capacitats per a personal de laboratoris en països de renda baixa i mitjana (LMIC).

Serveis

• Assajos ELISA i colorimètrics mitjançant kits comercials o desenvolupats internament per mesurar concentracions de diferents analits.
• Assajos multiplex de citocines mitjançant Luminex amb kits comercials per mesurar proteïnes com citocines, quimiocines, factors de creixement o altres, així com expressió gènica mitjançant panells Invitrogen™ QuantiGene™ Plex.
• Assajos multiplex d’anticossos mitjançant Luminex desenvolupats pel grup per mesurar nivells i avidesa d’IgM, IgA, IgA1, IgA2, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 i IgE davant de panells flexibles d’antígens de diferents microorganismes.
• Assajos funcionals d’anticossos mitjançant Luminex.
• Assajos Olink amb kits comercials per mesurar fins a 92 biomarcadors en format multiplex (T96, T48 i 21-Flex) (Certified International CoreLab).
• Altres assajos cel·lulars (cèl·lules T, cèl·lules B) sota demanda (citometria de flux, ELIspot/FluoroSpot). Per a aquestes tecnologies s’ofereix:
  • Assessorament sobre marcadors, tecnologies (ELISA, Luminex, Olink) i kits segons els objectius de l’estudi.
  • Disseny experimental.
  • Contacte amb proveïdors i elaboració de pressupostos.
  • Compra de reactius i kits.
  • Execució dels assajos.
  • Control de qualitat (QA/QC) de les dades generades.
  • Addicionalment: citometria de flux i ELIspot/FluoroSpot (adquisició/lectura mitjançant la plataforma IDIBAPS).

Equipament

• CytoFLEX (Beckman Coulter)
• Accés a la unitat de citometria de flux del PCB (Cytek Aurora; 4 làsers, espectral)
• Accés al lector de microplaques ELISA del PCB (lector de microplaques TECAN Infinite® M Plex)
• Dos rentadors automàtics (BioTek)
• Equips Luminex: un Magpix, un Luminex 100/200 i dos FlexMap3D
• Accessoris per a assajos Luminex:
  • Kingfisher Flex 96 deepwell (Thermo Fisher) per a l’acoblament automàtic d’antígens
  • Integra Assist Plus i Integra Viaflo 384 (Integra) per al maneig de líquids en plaques de 384 pous
  • Dos agitadors orbitals per a plaques de 96 pous (Thermo Fisher)
  • Dos agitadors orbitals per a plaques de 384 pous (Heidolph Titramax)
• Guava easyCyte per al recompte automàtic de microesferes i cèl·lules
• OLINK Signature Q100
• Accessoris per a assajos OLINK:
  • Plaques d’interfície Signature Q100: 96.96, 48.48 i 24.192
  • Centrífuga per a plaques (Eppendorf 5430/5430R)
  • Microcentrífuga per a tubs (IKA Mini G, Fisher Scientific)
  • Vòrtex controlat per a plaques (MaxMate Eppendorf)
  • Suport de tubs per a vòrtex (MixMate PCR 96, Eppendorf)
  • Pipetes de precisió mono i multicanal (Rainin, Mettler Toledo)
  • Bloc de congelació (-20 ºC) per al maneig enzimàtic
  • Termociclador PCR (SimpliAMP, Applied Biosystems)
• Programari per a ELISA (GraphPad Prism), Luminex (Xponent 4.3), Olink (NPX Signature) i citometria de flux (FlowJo)
• Ella™ automated ELISA (Bio-Techne)

Aquest servei científic (core facility) forma part de la plataforma CERCAGINYS.