Respuesta Inmunitaria y Biomarcadores

El Servicio de Respuesta Inmune y Biomarcadores proporciona cuantificación avanzada de una amplia gama de biomarcadores en diversos tipos de muestras biológicas, utilizando tecnologías como ELISA, xMAP Luminex y proteómica dirigida con OLINK (Certified International Core Lab).

Los biomarcadores analizados son principalmente proteínas, incluyendo anticuerpos de diferentes isotipos y subclases frente a paneles de antígenos personalizados, así como otros analitos relacionados con el sistema inmunitario como citocinas, quimiocinas y factores de crecimiento. Además, también pueden evaluarse biomarcadores asociados a otras vías fisiológicas, incluyendo procesos metabólicos, neurológicos y cardiovasculares.

Las principales fortalezas de la plataforma incluyen:

• Capacidad de multiplexado, que permite generar datos multiparamétricos a partir de una sola muestra (Luminex y OLINK).
• Miniaturización, adecuada para estudios con volúmenes limitados de muestra (p. ej., cohortes pediátricas).
• Versatilidad y adaptabilidad (necesidades personalizadas; kits comerciales o desarrollados internamente).
• Alta capacidad de procesamiento mediante sistemas semiautomatizados de manejo de líquidos.
• Ensayos funcionales de anticuerpos (p. ej., inhibición de unión y neutralización subrogada).
• Complementariedad de tecnologías, que permite la validación cruzada de biomarcadores (p. ej., Luminex vs OLINK para citocinas y otros biomarcadores).

Se desarrollan paneles personalizados utilizando proteínas recombinantes (comerciales o producidas internamente en sistemas procariotas o eucariotas) y anticuerpos monoclonales (mAbs) para aplicaciones específicas. Esto permite un fenotipado inmunológico en profundidad, mediante citometría espectral, así como el análisis de respuestas específicas de células T mediante tinción intracelular de citocinas (ICS) y ensayos de marcadores inducidos por activación (AIM), junto con citometría de flujo y ensayos ELIspot/FluoroSpot.

Se ofrecen las siguientes capacidades y conocimientos específicos como valor añadido:

• Amplia experiencia en monitorización inmunológica.
• Trayectoria consolidada del equipo.
• Control de calidad (QA/QC) integrado y pipelines de preprocesamiento en R.
• Posibilidad de realizar análisis estadísticos, asesoramiento, formación y desarrollo de capacidades para personal de laboratorio en países de renta baja y media (LMIC).

Servicios

• Ensayos ELISA y colorimétricos mediante kits comerciales o desarrollados internamente para medir concentraciones de diferentes analitos.
• Ensayos multiplex de citocinas mediante Luminex con kits comerciales para medir proteínas como citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento u otros, así como expresión génica mediante paneles Invitrogen™ QuantiGene™ Plex.
• Ensayos multiplex de anticuerpos mediante Luminex desarrollados por el grupo para medir niveles y avidez de IgM, IgA, IgA1, IgA2, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 e IgE frente a paneles flexibles de antígenos de distintos microorganismos.
• Ensayos funcionales de anticuerpos mediante Luminex.
• Ensayos Olink con kits comerciales para medir hasta 92 biomarcadores en formato multiplex (T96, T48 y 21-Flex) (Certified International CoreLab).
• Otros ensayos celulares (células T, células B) bajo demanda (citometría de flujo, ELIspot/FluoroSpot). Para estas tecnologías se ofrece:
  • Asesoramiento sobre marcadores, tecnologías (ELISA, Luminex, Olink) y kits según los objetivos del estudio.
  • Diseño experimental.
  • Contacto con proveedores y elaboración de presupuestos.
  • Compra de reactivos y kits.
  • Ejecución de ensayos.
  • Control de calidad (QA/QC) de los datos generados.
  • Adicionalmente: citometría de flujo y ELIspot/FluoroSpot (adquisición/lectura mediante la plataforma IDIBAPS).

Equipamiento

• CytoFLEX (Beckman Coulter)
• Acceso a la unidad de citometría de flujo del PCB (Cytek Aurora; 4 láseres, espectral)
• Acceso al lector de microplacas ELISA del PCB (lector de microplacas TECAN Infinite® M Plex)
• Dos lavadores automáticos (BioTek)
• Equipos Luminex: un Magpix, un Luminex 100/200 y dos FlexMap3D
• Accesorios para ensayos Luminex:
  • Kingfisher Flex 96 deepwell (Thermo Fisher) para acoplamiento automático de antígenos
  • Integra Assist Plus e Integra Viaflo 384 (Integra) para manejo de líquidos en placas de 384 pocillos
  • Dos agitadores orbitales para placas de 96 pocillos (Thermo Fisher)
  • Dos agitadores orbitales para placas de 384 pocillos (Heidolph Titramax)
• Guava easyCyte para recuento automático de microesferas y células
• OLINK Signature Q100
• Accesorios para ensayos OLINK:
  • Placas de interfaz Signature Q100: 96.96, 48.48 y 24.192
  • Centrífuga para placas (Eppendorf 5430/5430R)
  • Microcentrífuga para tubos (IKA Mini G, Fisher Scientific)
  • Vortex controlado para placas (MaxMate Eppendorf)
  • Soporte de tubos para vortex (MixMate PCR 96, Eppendorf)
  • Pipetas de precisión mono y multicanal (Rainin, Mettler Toledo)
  • Bloque de congelación (-20ºC) para manejo enzimático
  • Termociclador PCR (SimpliAMP, Applied Biosystems)
• Software para ELISA (GraphPad Prism), Luminex (Xponent 4.3), Olink (NPX Signature) y citometría de flujo (FlowJo)
• Ella™ automated ELISA (Bio-Techne)

Este servicio científico (core facility) forma parte de la plataforma CERCAGINYS.